谷草转氨酶（GOT）活性测定试剂盒说明书
微量法 100管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义
GOT（ 2.6.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化可逆转氨基反应，是氨基酸代谢的重要酶。此外，GOT在心肌细胞中含量最高，临床上一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。肝脏损害时其血清浓度也可升高。
测定原理
GOT催化 α-同戊二酸和天门冬氨酸发生转氨基反应，生成谷氨酸和草酰乙酸，草酰乙酸进一步自行脱羧生成丙酮酸；丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应生成2,4-二硝基苯腙，在碱性条件下显棕红色；测定505nm吸光度的变化，即可计算GOT酶活力。
需自备的仪器和用品
可见分光光计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体2.5 mL×1瓶， 4℃保存；
试剂二：液体2.5 mL×1瓶， 4℃保存；
试剂三：液体25 mL×1瓶，4℃保存；
样品测定的准备
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定操作表
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试剂名称（μL） |
测定管 |
对照管 |
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待测样本 |
10 |
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|
煮沸10min的待测样本 |
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10 |
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试剂一 |
25 |
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蒸馏水 |
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25 |
混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确反应20min
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试剂二 |
25 |
25 |
混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确反应20min
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试剂三 |
240 |
240 |
混匀，室温（25℃）放置10min，505nm波长处测各管吸光度A。ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。
计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归曲线， y = 0.4768x-0.0013 (x为标准品浓度，umol/mL；y为ΔA)。
2、血清（浆）GOT活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/mL）=（ΔA+0.0013）÷0.4768÷T×103=104.9×（ΔA+0.0013）
3、细胞、细菌和组织中GOT活力的计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/mg prot）=[（ΔA+0.0013）÷0.4786×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =104.9×（ΔA+0.0013）÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/g鲜重）=[（ΔA+0.0013）÷0.4768×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =104.9×（ΔA+0.0013）÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/104 cell）=[（ΔA+0.0013）÷0.4768×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.21×（ΔA+0.0013）
V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，20min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；103：1umol/mL=103 nmol/mL。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
1、标准条件下测定的回归曲线， y = 0.2384x-0.0013 (x为标准品浓度，umol/mL；y为ΔA)。
2、血清（浆）GOT活力的计算
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/mL）=（ΔA+0.0013）÷0.2384÷T×103=209.7×（ΔA+0.0013）
3、细胞、细菌和组织中GOT活力的计算
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/mg prot）=[（ΔA+0.0013）÷0.2384×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =209.7×（ΔA+0.0013）÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/g鲜重）=[（ΔA+0.0013）÷0.2384×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =209.7×（ΔA+0.0013）÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。
GOT（nmol/min/104 cell）= [（ΔA+0.0013）÷0.2384×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.419×（ΔA+0.0013）
V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，20 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；103：1umol/mL=103 nmol/mL。
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资料/datasheet
