菌株概念及传代：
- 标准菌株：直接从官方菌种保藏机构获得并至少定义到属或种的水平的菌株。通常默认为第0代菌株。
- 标准储备菌株：将标准菌株在实验室转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株。通常为第1代或第2代菌株。
- 储备菌株：从标准储备菌株转接一代获得的培养物。通常为第2代或第3代菌株。
- 工作菌株：由标准储备菌株、 储备菌株或标准物质（经证明或未经证明） 转接一代获得的菌株。通常为第3-5代菌。传代：每一次的转接培养都是一次传代的过程，可以使用液体、固体或半固体培养基。
注意事项：菌株传代只能由上往下传，储备菌株可以做为工作菌株使用，但工作菌株不能做为储备菌株使用。实验室使用的工作菌株一般不可超过第5代。常用培养基种类：斜面培养基、半固体培养基、液体培养基、平板培养基。接种方法：涂布法、划线法、穿刺法、直接加入法等。
菌种的复苏与保存应在超净工作台或生物安全柜内进行。
一、菌种的复苏
把冻干菌种管、灭菌1mL滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入超净工作台或生物安全柜。
先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕，再将冻干菌种管外壁用dian酒擦洗消毒、稍干，用75%乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。
取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面置35~37℃培养22~24h。
取出培养物，仔细观察菌苔形态、有无杂菌、涂片、革兰氏染色镜检，呈典型菌落后，转种3代即可应用。如发现菌型不典型，可进行平板分离单菌落。
二、菌种的传代与保存
1：菌斜面（保存）
培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。标签上注明菌名及接种日期。
至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。
点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。
堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开棉塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。
取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。
将已接种毕的细菌管置35~37℃培养22~24小时，霉菌管一般置20~25℃霉菌培养箱内培养7日。取出后放人冰箱保存，一般 3个月转种一次。
2：菌斜面-营养肉汤-分离平板-菌斜面
如果菌落形态不典型可纯化，按下列方法传代（分离菌落）：用接种环取上述菌管（斜面）菌苔少许接种置营养肉汤中(5mL/支，已灭菌)，置35~37℃培养18~24小时后，再用接种环取培养好的营养肉汤菌悬液（浓菌液），接种于分离平板，置35~37℃培养18~24小时，用接种针选典型菌落划线于营养琼脂斜面，置35~37℃培养18~24小时。一般同时接种几支管，其中一支用于以后菌种传代或接种到半固体琼脂培养基中，其它用做工作菌种。
常用分离平板包括：大肠埃希菌——EMB琼脂平板；铜绿假单胞菌——溴化十六烷*铵琼脂培养基；金黄se葡萄球菌——甘露醇氯化钠琼脂培养基。
三、菌悬液的制备
取上述培养好的菌种斜面移入超净工作台或生物安全柜，放置室温后，用接种环取菌苔少许接种置营养肉汤中(5mL/支，已灭菌), 将已接种毕的细菌管置35~37℃培养18~24小时，取出备用。一般于冰箱中保存可用7天。
四、对照用菌液制备
取上述培养好的营养肉汤菌悬液（浓菌液1mL，加到9mL，0.9%无菌氯化钠溶液混匀，为10-1，再取另一只吸管吸取10-1菌液1mL加到9mL，0.9%无菌氯化钠溶液混匀，为10-2……以此类推，稀释至含活菌数在50 ~ 100个。用平板计数。此稀释菌液用于试验后加阳性对照，可在1天内使用。
五、菌种保管
菌种保管应有专人负责，保存与加锁的冰箱中或特制的白铁箱中加锁置阴暗处，确保菌种安全。因工作变动时，必须做好交接工作。菌种应有详细登记本，包括名称、分离日期、鉴定日期、鉴定者、主要鉴定性能，并注意记录使用、转移及销毁情况和原因。各种菌种应按规定时间定期移种。一般每移种3次后作一次全面鉴定。注意菌种有无污染和变异，如，发现污染和变异时，应及时更换。购置菌种，应有介绍信。全部保存菌种应具备清单，并定期向部门负责人报告。
