01.检测目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中脯氨酸羟化酶 2(PHD2)活性。
02.实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠脯氨酸羟化酶2(PHD2)水平。用纯化的小鼠脯氨酸羟化酶 2(PHD2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脯氨酸羟化酶 2(PHD2)，再与 HRP 标记的脯氨酸羟化酶 2(PHD2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脯氨酸羟化酶2(PHD2)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠脯氨酸羟化酶 2(PHD2)活性。
03.试剂盒组成:
04.样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右 （2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，
应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混 合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细
收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。 仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、
脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分 钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份
时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离
心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。 用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。
加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。 离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后
一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快 进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应
避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
※注意：血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本，以免影响检测结 果；如果样本中的靶标物检测浓度高于标准品的最高值，请将样
品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实验以确定稀释 倍数。
05.自备实验器材（不提供，可代购）：
1. 酶标仪（主波长 450nm，参考波长 630nm）
2. 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板机或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 双蒸水，去离子水，量筒等
6. 稀释用聚丙烯试管
06.操作步骤：
07.注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使 用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗 涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验 误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐
使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物 质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先
用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘 以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数 为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
08.计算数据：
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标 准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以
稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回 归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘
以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
09.检测范围：
0.4IU/L-22IU/L
10.保存条件及有效期：
1.试剂盒保存： 2-8℃。
2.有效期： 6 个月
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资料/datasheet
