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商品属性:
产品名称
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规格
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货号
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T4 多聚核苷酸激酶(3'磷酸酶活性缺失)
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1000U
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A-PJ1154
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描述:T4 多聚核苷酸激酶(T4 PNK)能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链 DNA 或 RNA)的 5’-羟基末端以及 3’-单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶还具有3’磷酸酶活性,将3’磷酸基团从寡核苷酸的 3’磷酸末端、脱氧 3’-单磷酸核苷和脱氧 3’-二磷酸核苷上水解掉。该酶经后,其 3’磷酸酶活性缺失,但仍保留了所有激酶的活性。
![](/usr/uploads/3/202309/T4 多聚核苷酸激酶(3'磷酸酶活性缺失).png)
储存:-20℃ 可保存 2 年。
活性定义:
1Unit 指 37℃条件下,30 分钟内催化 1nmol 酸不溶性[32P] 掺入所需要的酶量。
注意:
(1)1×T4 PNK Buffer:70 mM Tris-HCl pH 7.6,10 mMMgCl2,5 mM DTT。
(2)热失活:65°C 加热 20 分钟。
(3)一般来说,进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下,T4 多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中 37°C温育 30 分钟即可。反应后的产物可直接进行连接,无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化状态,则需要在连接反应前热失活 T4 多聚核苷酸激酶。
![](/usr/uploads/3/202309/T4 多聚核苷酸激酶(3'磷酸酶活性缺失)2.png)
\注意:1 pmol 的 5’末端 DNA,相当于 1 μg 的 PCR 产物(3kb 大小)。