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pBM30 Toposmart Cloning Kit(TOPO克隆载体 原核表达)
A-Hc2209
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pBM30 Toposmart Cloning Kit(TOPO克隆载体 原核表达)

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产品介绍:
利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将PCR产物定向克隆到线性化的pBM30原核表达载体中。适用于克隆由Pfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物。引物T7和T7t可用于菌落PCR和测序鉴定。
产品特点:
(1) 连接反应仅需 5 分钟
(2) 只适合平末端PCR 产物的快速、高效、定向克隆。
(3) 载体采用了新的制备工艺,零背景,无需蓝白斑筛选。
(4) 具有T7 启动子,类似于 pET30 载体,具备原核表达所需的所有调控元件。适用于外源基因在大肠杆菌中的高水平表达。
(5) 带 His.tag 和 S.tag 两种纯化标签。
(6) 具有凝血酶和肠激酶两种蛋白酶酶切识别序列。
(7) 载体具有卡那霉素抗性。
注意事项:
(1) 引物要求:PCR 引物 5’端不能进行磷酸化修饰,普通商业化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四个碱基。如果表达蛋白需 C 端带 6His 标签,下游引物则需要去掉基因本身的终止密码子(3 个碱基)。目的蛋白的翻译终止由 6His 标签的终止密码子TGA 来实现。
(2) DNA 聚合酶:选用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 扩增。
(3) 连接时间:5-15 分钟,一般为 15 分钟。

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