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4T1+luc小鼠乳腺癌细胞荧光素酶标记
A01X1027
4T1luc:4T1+luc
4T1+luc小鼠乳腺癌细胞荧光素酶标记 4T1+luc小鼠乳腺癌细胞荧光素酶标记 展开
1640+10%FBS+1%P/S
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1、细胞传代:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时,弃 25cm2培养瓶中的培养液,用 PBS 清洗细胞一次;

2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养

液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至 15ml 离心管中,1000rpm 离心 5min;

3)弃上清,沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬,然后按 1:2 比例进行分瓶传代,最后放入 37℃,5%CO2细胞

培养箱中培养;

2、细胞冻存:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时,弃 25cm2培养瓶中的培养液,用 PBS 清洗细胞一次;

2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终

止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至 15ml 离心管中,1000rpm 离心 5min;

3)用适量的冻存液(

FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;

4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h 后转入液氮中进行长期保存。使用程序

降温盒可直接放入-80℃。

3、细胞复苏:

1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结

晶,然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2)将冻存管中的细胞移至含 6ml 完全培养基的 15ml 离心管中, 1000rpm 离心 5min;

3)弃上清,沉淀用 6ml 完全培养基重悬,接种 25cm2培养瓶,于 37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

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