土壤铵态氮试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
土壤中的铵态氮可被土壤胶体吸附,呈交换性铵状态氮肥,也可溶解在土壤溶液中,能直接被植物吸收利用,属于速效性氮素。
测定原理
土壤中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,在625nm处有特征吸收峰,吸光值与铵态氮含量成正比。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。
试剂组成和配制
提取液:液体110mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×2瓶,4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加4mL双蒸水溶解,现配现用。
试剂二:液体8mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体2mL×1瓶,4℃保存。
样本处理
按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g新鲜土样,加入1mL提取液),振荡提取1h,10000g ,25℃离心10min,取上清液待测。
测定操作表
- 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至625nm,蒸馏水调零。
- 操作表
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空白管
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测定管
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样本(μL)
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20
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提取液(μL)
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20
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试剂一(μL)
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80
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80
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试剂二(μL)
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80
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80
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充分混匀,25℃静置1h
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试剂三(μL)
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20
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20
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充分混匀,于微量石英比色皿/96孔板中,蒸馏水调零,测定625nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管
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计算公式
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y =0.1522x-0.0009,R2= 0.9993
NH4+—N含量(mg/kg 鲜重)=(△A+0.0009)÷ 0.1522÷W
= 6.57×(△A+0.0009)÷W
W :样本质量,g
- 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0761x-0.0009,R2= 0.9993
NH4+—N含量(mg/kg鲜重)=(△A+0.0009)÷ 0.0761÷W
= 13.14×(△A+0.0009)÷W
W:样本质量,g
注意事项
- 试剂一必须避光低温保存,配制好的试剂一4℃保存不能超过20天。
- 浸提液最好在当日完成测定,如果不能完成,可冷冻保存,但不能超过两天。