酸性土壤速效磷试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分,包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷,土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。
测定原理
用双酸法提取酸溶性磷和吸附态磷,用钼锑抗比色法测定。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪。
试剂组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体6mL×1支,4℃保存。
试剂二: 粉剂×1支,4℃避光保存。临用前加2mL蒸馏水溶解。用不完的试剂4℃保存。
试剂三: 粉剂×3支,4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解。现配现用。
样本处理
新鲜土样风干,过30-50目筛,按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g土样,加入1mL提取液),振荡提取30min,10000g ,25℃离心10min,取上清液待测。
测定步骤
- 取试剂三一支,加入1mL蒸馏水充分溶解待用。
- 显色液的配制(可测50个样):取EP管一支,加入660μL试剂一,再加入100μL试剂二,充分混匀后,再加入240μL试剂三,充分混匀待用;配好的显色液应为黄色,若变蓝则为磷污染;显色液必须现配现用;若一次性测不了50个样,可按比例缩小各试剂体积。
- 操作表
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空白管
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测定管
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样本(μL)
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40
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提取液(μL)
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40
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显色液(μL)
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20
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20
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H2O(μL)
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140
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140
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充分混匀,25℃静置30min
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于微量石英比色皿/96孔板中,蒸馏水调零,测定660nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。
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计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y =0.1252x-0.0041,R2 = 0.9957,x为标准品浓度(mg/L),y为吸光值。
速效磷含量(mg/kg干重)=(△A+0.0041)÷ 0.1252×V样÷(W×V样÷V样总)
= 7.987×(△A+0.0041)÷W
V样:样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,约0.1g
- 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y =0.0626x-0.0041,R2 = 0.9957,x为标准品浓度(mg/L),y为吸光值。
速效磷含量(mg/kg干重)=(△A+0.0041)÷ 0.0626×V样÷(W×V样÷V样总)
= 15.97×(△A+0.0041)÷W
V样:样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,约0.1g
注意事项
- 配好的显色液当天用完,变蓝则不能使用。
- ΔA线性范围为:0.01-1.5。
- 标准曲线线性范围为:0.1mg/L-20mg/L。