土壤全硼试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硼是植物生长发育必需的七种微量营养元素之一,土壤中硼素的含量高低直接影响着植物的生长状况。
测定原理
硼与甲亚胺在弱酸条件下形成棕黄色配合物,在420nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、马弗炉、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制
提取剂:粉剂×1瓶,4℃保存。
提取液:液体100mL×4瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加8mL水溶解,加0.125mL乙酸。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。
样本处理
新鲜土样风干,过100目筛,按照土壤质量(g):提取剂质量(g)为1:4的比例(建议称取约0.1g土样,加入0.4g提取剂)缓慢加入提取剂于坩埚中,边加边搅拌均匀,然后在马弗炉中550℃熔融10min,然后在920℃熔融30min,趁热取出坩埚,将熔融物转入烧杯,边搅拌边加4mL提取液,必要时加盖,防止溶液溅出,溶解30min后,5000g ,25℃离心10min,取上清液待测。
测定操作表
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空白管
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测定管
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样本(μL)
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40
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试剂一(μL)
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80
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80
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试剂二(μL)
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40
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40
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H2O(μL)
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80
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40
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充分混匀,25℃黑暗中静置1h
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于微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定420nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管
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计算公式
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.3897x - 0.2359,R² = 0.9995
全硼含量(mg/kg)=(△A+0.2359)÷ 0.3897×V反总÷(W×V样÷V样总)
= 51.32×(△A+0.2359)÷W
V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,4mL,W:样本质量,g
- 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1949x - 0.2359,R² = 0.9995
全硼含量(mg/kg)=(△A+0.2359)÷ 0.1949×V反总÷(W×V样÷V样总)
=102.64×(△A+0.2359)÷W
V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.04mL;V样总:加入提取液体积,4mL,W:样本质量,g
注意事项
- 配制好的试剂二4℃保存不可超过7天。
- 显色时严格控制温度并且避光,以免显色剂见光分解。