维生素B1（Vitamin B1，VB1）试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
维生素B1（Vitamin B1）是构成脱羧辅酶的主要成分，参与细胞代谢中的三羧酸循环，是维持机体正常代谢必须的水溶性维生素，在生物体能量代谢中有重要的作用。
测定原理
VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝，在704nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液：液体70mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体1mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体2mL×1支，4℃保存。
试剂三：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。
样本处理
测定操作
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空白管 |
测定管 |
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样品（μL） |
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20 |
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试剂一（μL） |
20 |
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试剂二（μL） |
16 |
16 |
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试剂三（μL） |
20 |
20 |
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充分混匀，80℃反应10min |
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提取液（μL） |
16 |
16 |
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试剂四（μL） |
44 |
44 |
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试剂五（μL） |
24 |
24 |
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H2O（μL） |
60 |
60 |
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充分混匀，静置20min，于微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定704nm处吸光值，记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管。 |
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计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.017x+0.0031，R2 = 0.9991；x为标准品浓度：μg/mL；y为△A（A测定管-A空白管）
1. 按照蛋白含量计算
VB1含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr
= 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB1含量（μg/g鲜重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V样总）
= 58.8×（△A-0.0031）÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（细胞数量÷V样总）
= 58.8×（△A-0.0031）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB1含量（μg/mL）=（△A-0.0031）÷ 0.017
= 58.8×（△A-0.0031）
V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b．用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0085x +0.0031，R2 = 0.9991；x为标准品浓度：μg/mL；y为△A（A测定管-A空白管）
1. 按照蛋白含量计算
VB1含量（μg/mg prot）=（△A -0.0031）÷ 0.0085÷Cpr
= 117.65×（△A-0.0031）÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VB1含量（μg/g鲜重）=（△A-0.0031））÷ 0.0085÷（W÷V样总）
= 117.65×（△A-0.0031）÷ W
3. 按照细胞数量计算
VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.0085÷（细胞数量÷V样总）
= 117.65×（△A-0.0031）÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VB1含量（μg/mL）=（△A-0.0031）÷ 0.0085
= 117.65×（△A-0.0031）
V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g
注意事项
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资料/datasheet
