尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP）试剂盒说明书
微量法100T/96S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。
测定原理
UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板
试剂组成和配制
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取
测定操作
计算公式
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
（3）按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T
=321.54×ΔA÷细胞数量
（4）按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /mL）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷V样÷T=321.54×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b.使用96孔板测定的计算公式如下
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /g 鲜重）＝ΔA÷（ε×d）×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T=643.08×ΔA÷W
（3）按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总) ÷T
=643.08×ΔA÷细胞数量
（4）按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /mL）=ΔA÷（ε×d）×V反总÷V样÷T=643.08×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g
扫描二维码
扫描二维码
资料/datasheet
