纤维素（CLL）含量试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖，通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起，是植物细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维，是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖。
测定原理：
纤维素为β－葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热能分解成β－葡萄糖。β－葡萄糖在强酸作用下，可脱水生成β－糠醛类化合物。β－糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合，生成糠醛衍生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体100mL× 1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体10mL× 1支，4℃保存。
样品的前处理：
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95度。
3、工作液的配制：在试剂二中加入4mL试剂三，充分溶解，如较难溶解，可加热搅拌；用不完的试剂4℃保存一周；
4、加样表（在EP管中反应）：
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试剂（μL） |
空白管 |
测定管 |
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样本 |
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150 |
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蒸馏水 |
150 |
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工作液 |
35 |
35 |
|
浓硫酸 |
315 |
315 |
混匀，置95度水浴中10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，于620nm处，分别读取空白管和测定管吸光值，ΔA=A测定管-A空白管。
注意：
1、空白管只要做一管。
2、由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。
纤维素含量计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 7.875x - 0.0043；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、按样本质量计算：
纤维素（mg /g干重）= [(ΔA＋0.0043) ÷7.875×V1]÷（W×V1÷V2）×20=3.17×(ΔA＋0.0043) ÷W。
V1：加入样本体积，0.15mL；V2：加入提取液体积，1.25mL；W：样本干重，5×10-3g；20：样本稀释倍数。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归方程为y = 5.25x - 0.0043；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。
2、按样本质量计算：
纤维素（mg /g干重）= [(ΔA＋0.0043) ÷5.25×V1]÷（W×V1÷V2）×20=4.76×(ΔA＋0.0043)
÷W。
V1：加入样本体积，0.15mL；V2：加入提取液体积，1.25mL；W：样本干重，约5×10-3g；20：样本稀释倍数。
注意：最低检测限为1mg/g干重或10ng/ mg prot
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资料/datasheet
