血清低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol , LDL-C)试剂盒说明书
微量法 100管/96样
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
低密度脂蛋白为血清蛋白之一,主要由肝脏合成,与冠心病的发生和动脉粥样硬化损伤呈正相关,是脂类疾病分类和风险预测的一个重要指标。
测定原理
用沉淀剂分离血清中的低密度脂蛋白胆固醇,利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇和游离脂肪酸,从而把胆固醇酯转化为FC;进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化,生成△4-胆甾烯酮和H2O2;再利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成红色醌类化合物;在500nm有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品
离心机,恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前加5mL试剂四充分溶解。
试剂四:液体10mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体1mL×1支,4℃保存。
样品处理
取血后3小时内分离血清,将血清样品与试剂一按照2:1的比例充分混匀,25℃静置15min,2000g离心15min,上清置于冰上待测。
测定操作表
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空白管
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标准管
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测定管
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蒸馏水(μL)
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4
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标准品(μL)
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4
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样本(μL)
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4
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试剂二(μL)
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150
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150
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150
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试剂三(μL)
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50
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50
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50
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混匀,37℃静置30min,于1mL玻璃比色皿,空白管调零,测定500nm处吸光值A。分别记为A标准管和A测定管
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计算公式
- 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
LDL-C含量(mmol/L)= A测定管÷A标准管×C标准管
=5×A测定管÷A标准管
C标准管:5mmol/L
b.用96孔板测定的计算公式如下
LDL-C含量(mmol/L)= A测定管÷A标准管×C标准管
=5×A测定管÷A标准管
C标准管:5mmol/L
注意事项
- 样本切勿反复冻融,最好在取血后12小时内完成测定。
- 配置好的试剂三4℃保存可半个月。
- 线性范围为0.17mmol/L- 4.2mmol/L。