乳酸含量（lactic acid，LA）试剂盒说明书
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理
乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体2mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。临用前加入0.6mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加6mL蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1支，4℃避光保存。
标准品：液体1mL×1支，4℃保存。
显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（mL)：0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有4个棕色空瓶）
样本处理
测定操作
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样品对照管 |
样品测定管 |
标准对照管 |
标准测定管 |
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样品（μL） |
10 |
10 |
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标准品（μL） |
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10 |
10 |
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H2O（μL） |
60 |
90 |
60 |
90 |
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试剂一（μL） |
30 |
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30 |
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试剂二（μL） |
40 |
40 |
40 |
40 |
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显色液（μL） |
60 |
60 |
60 |
60 |
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充分混匀，于37℃反应30min，于微量石英比色皿/96孔板，测定530nm处吸光值，分别记为A1，A2，A3，A4，△A样=A2-A1；△A标= A4-A3 |
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注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管
计算公式
1. 按照蛋白含量计算
LA含量（μmol/mg prot）= △A样÷△A标×C标÷ Cpr
= 2×△A样÷△A标÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
LA含量（μmol/g 鲜重）= △A样÷△A标×C标÷ W
= 2×△A样÷△A标÷ W
LA含量（μmol/104 cell）= △A样÷△A标×C标÷ 细胞数量
= 2×△A样÷△A标÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
LA含量（μmol/mL）= △A样÷△A标×C标
= 2×△A样÷△A标
C标：标准品浓度，2mmol/L；W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL
注意事项
若吸光值超过2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
最低检出限为1.8μmol/L。
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资料/datasheet
