总巯基测定试剂盒说明书
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。
测定原理：
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。
自备实验用品：
天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96孔板、乙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体18mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体1mL×1管，4℃避光保存。
样品的制备：
操作步骤：
在96孔板中加入如下试剂
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对照管 |
测定管 |
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样品（μL） |
40 |
40 |
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试剂一（μL） |
150 |
150 |
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试剂二（μL） |
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10 |
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乙醇（μL） |
10 |
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混匀，25℃静置10min，测定412nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。每个测定管设一个对照管。 |
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计算公式：
总巯基标准曲线：y = 1.8111x - 0.0037，R2 = 1，x为标品浓度，单位μmol/mL，y为吸光度ΔA。
1. 组织：
（1）按样本重量计算
总巯基含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V样总÷W
=0.552×（ΔA+0.0037）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
总巯基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V样总÷Cpr
=0.552×（ΔA+0.0037）÷Cpr
2. 血清、培养液：
总巯基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×5×103
=2761×（ΔA+0.0037）
V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；5：血清，培养液等液体样本稀释倍数；103 ：1mmol/ L=103μmol/ L
注意事项
最低检出限为10μmol/L。
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资料/datasheet
