NADH氧化酶（NADH oxidase，NOX）试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD。该酶不仅参与NAD的再生，而且与免疫反应密切相关。
测定原理：
NOX能够将NADH氧化为NAD，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水
试剂的组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：液体20mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：液体1.5mL×1瓶，-20℃保存；
试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入5mL蒸馏水，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
（1）试剂四于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、200μL试剂四和40μL试剂五，混匀，记录600nm处20s时吸光值A1和 1min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。
NOX活力单位的计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）NOX活力的计算:
单位的定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=2500×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.01÷T=2500×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.01÷T=505×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.01定义为一个酶活力单位。
NOX（U/104 cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.01÷T=1.01×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.25mL； V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细胞或细菌总数，500万。
b.使用96孔板测定的计算公式如下：
1、血清（浆）NOX活力的计算:
单位的定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mL）＝ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=5000×ΔA
2、组织、细菌或细胞中NOX活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。
NOX（U/mg prot）=ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.005÷T=5000×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。
NOX（U/g 鲜重）=ΔA×V反总÷(W× V样÷V样总)÷0.005÷T=1010×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A600变化0.005定义为一个酶活力单位。
NOX（U/104 cell）=ΔA×V反总÷(500×V样÷V样总)÷0.005÷T=2.02×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.25mL； V样：加入样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量；500：细胞或细菌总数，500万。
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资料/datasheet
