阈值循环数 Threshold cycle (Ct) 也写作Cq值,荧光信号大于荧光阈值时PCR循环数。仪器软件通常将第3-15个循环的荧光值设为基线(baseline),是由于测量的偶然误差引起的。阈值(threshold)一般是基线的标准偏差的10倍。在实际操作中也可以手动调节。高于阈值的荧光信号被认为是真实的信号,用于定义Ct值。Ct会受到阈值的影响,每次试验由于样品和仪器的不同会导致基线不同,进而影响阈值和Ct值。
血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体,是血浆去除纤维蛋白后的混合物,主要成分包括蛋白质、氨基酸、糖类、维生素和多肽(如生长因子、胰岛 素、促生长激素)等。血清是细胞培养过程中重要的营养物质,同时也对细胞起到一定的保护作用。
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。在检测时,受检标本(测定其中的抗原)与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体,通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA)在生物实验技术中,ELISA是一种非常常见的分析方法。其原理是抗原或抗体的固相化及抗原抗体的酶标记。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析。该实验因其灵敏度较高,特异性较好,操作较简单,可大批量操作而广泛应用于多种传染性疾病的筛查工作中。而在进行ELISA实验的过程中,有时会遇到一种被称为“花板”的现象。
“花板”现象,顾名思义,是指在进行ELISA实验时,酶标板上的反应孔出现了不均匀的颜色分布,使得孔内的颜色看起来像是“花”一样。所谓“花板”,就是空白、阴性、阳性对照及室内质控孔结果正常,而标本孔的OD值却偏高,弱阳性结果较多。这一现象的出现,影响了实验结果的准确性,往往是由于实验过程中的某些操作不当或试剂的问题所导致的。对“花板”现象进行了分析和总结,认为花板原因大多在样品,解决办法主要在洗涤,孵育和显色过程也会导致。