微生物实验室是进行微生物学研究和实验的场所,然而,实验室微生物的污染情况普遍存在,主要是细菌、真菌和支原体等,极易引发生物安全事件。为确保实验室安全和实验结果的准确性与科学性,对实验室进行消毒和灭菌至关重要。
一、消毒方法
1. 物理消毒方法:物理消毒方法主要包括紫外线消毒、高温消毒、蒸汽消毒和过滤消毒等。紫外线消毒是通过紫外线照射破坏微生物的DNA结构,使其失去繁殖能力;高温消毒是通过提高温度杀死微生物;蒸汽消毒是利用高温高压的蒸汽杀死微生物;过滤消毒则是通过过滤器将微生物截留在滤膜上,达到消毒目的。
2. 化学消毒方法:化学消毒方法是利用化学消毒剂杀死微生物。常用的化学消毒剂有酒精、碘伏、过氧化氢、甲醛等。使用化学消毒剂时应注意消毒剂的浓度、作用时间和使用对象,以免产生副作用。
二、灭菌方法
1. 物理灭菌方法:主要包括干热灭菌、湿热灭菌、辐射灭菌、过滤灭菌和射线杀菌法等。干热灭菌是通过高温干燥环境杀死微生物;湿热灭菌则是利用高温高压的蒸汽杀死微生物;辐射灭菌是通过核辐射破坏微生物的DNA结构,使其失去繁殖能力;过滤灭菌与过滤消毒原理相同,将微生物截留在滤膜上。
1).干热灭菌法
是利用恒温干燥箱内120℃-150℃的高热,并保持90-120分钟,杀死细菌和芽孢,达到灭菌目的的一种方法。
主要适用于不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。用此方法灭菌的物品干燥,易于贮存。酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一,在进行动物细胞体外培养工作时,常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。
2).湿热灭菌法
压力蒸汽湿热灭菌法是目前蕞常见的一种灭菌方法。它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力,使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。
适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0-1.1 kg/cm2,维持20-30min即可达到灭菌效果。
3).过滤除菌法
是将液体或气体通过有微孔的滤膜过滤,使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒阻留,从而达到除菌的方法。过滤除菌法大多用于遇热易发生分解、变性而失效的试剂、酶液、血清、培养液等。
目前,常用微孔滤膜金属滤器或塑料滤器正压过滤除菌,或用玻璃细菌滤器、滤球负压过滤除菌。滤膜孔径应在0.22-0.45μm范围内或用更小的细菌滤膜,溶液通过滤膜后,细菌和孢子等因大于滤膜孔径而被阻,并利用滤膜的吸附作用,阻制小于滤膜孔径的细菌透过。
4).射线灭菌法
利用紫外线灯进行照射灭菌的方法。紫外线是一种低能量的电磁辐射,可以杀灭多种微生物。紫外线的作用机制是通过对微生物的核酸及蛋白质等的破坏作用而使其灭活。
适合于实验室空气、地面、操作台面灭菌。灭菌时间为30min。用紫外线杀菌时应注意,不能边照射边进行实验操作,因为紫外线不仅对人体皮肤有伤害,而且对培养物及一些试剂等也会产生不良影响。
2、化学灭菌方法:
化学灭菌剂分为气体灭菌剂和液体灭菌剂。气体灭菌剂主要包括C2H4O、甲醛、过氧化氢等;液体灭菌剂主要包括醇类、酚类和酸类等。使用化学灭菌剂时,应根据实验要求选择合适的灭菌剂,并确保其在有效浓度下作用足够时间。
化学消毒剂消毒法
化学消毒剂使用范围比较广泛,可用于那些不能利用物理方法进行灭菌的物品、空气、工作面、操作者皮肤、某些实验器皿等。常用的化学消毒剂包括甲醛、KMnO4、70%-75%乙醇、C2H4O3、新洁尔灭、C2H4O、以及过氧化氢等。但是普通的化学消毒剂有残留和腐蚀性,在使用时应注意安全,特别是用在皮肤或实验材料上的消毒剂,须选用合适的药剂种类、浓度和处理时间,才能达到安全和灭菌的目的。而目前*食品级过氧化氢消毒剂具有安全绿色无残留的特点,可以进行实验材料的灭菌,同时搭配过氧化氢干雾灭菌器可以对无菌室和培养室的空气消毒。
微生物实验室是进行微生物研究的场所,对环境要求很高,应该保证实验室内的环境洁净安全,严格的消毒灭菌工作非常重要,影响着实验室顺利研究实验的顺利进行,同时严格的消毒灭菌也为实验室工作人员提供一个清洁而良好的工作环境。
三、实验室消毒和灭菌注意事项
1. 选择合适的消毒剂和灭菌剂:根据实验物品的材质、结构和微生物种类选择合适的消毒剂和灭菌剂,确保其在有效浓度和作用时间下达到消毒或灭菌效果。
2. 严格操作流程:在进行消毒和灭菌操作时,应遵循相关操作规程,确保实验安全。
3. 个人防护:实验室工作人员应穿戴防护服、口罩和手套等个人防护用品,防止感染风险。
4. 监测消毒和灭菌效果:通过定期监测实验室环境和实验物品的微生物指标,评估消毒和灭菌效果,确保实验室安全。
5. 定期维护和更换消毒灭菌设备:消毒和灭菌设备应定期进行维护和保养,确保其正常运行。同时,应及时更换过期或破损的消毒剂和灭菌剂,以免影响消毒灭菌效果。
总之,微生物实验室消毒和灭菌方法多种多样,应根据实验需求和实际情况选择合适的消毒和灭菌方法。同时,严格遵守操作规程,加强个人防护和监测,确保实验室安全。微生物实验室消毒和灭菌工作得到了越来越多的重视,相关技术和管理措施不断完善,为微生物学研究和发展创造了良好的条件。